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产品概况
- 多组氨酸标签（也称6xHis标签、His标签或His标签）是一种用途广泛的工具，可用于从包括细菌、酵母、植物细胞和哺乳动物细胞在内的各种表达系统中纯化高纯度重组蛋白。该标签由位于重组蛋白N端或C端的六个或更多连续组氨酸残基组成。由于其体积小，His标签具有几个独特的特性，包括免疫原性低、亲水性强以及在天然和变性条件下均具有良好的稳定性。此外，由于该标签很少干扰融合蛋白的结构和功能，因此无需将其从重组蛋白上切割下来。His标签的纯化原理是固定化金属离子亲和层析（IMAC）。固定化金属离子亲和层析 (IMAC) 是一种快速亲和纯化层析方法，其原理是利用组氨酸标签蛋白与螯合剂固定在固相基质（例如琼脂糖珠或柱）上的 Ni²⁺ 或 Co²⁺ 的亲和力进行分离。在 pH 7-8 时，组氨酸标签蛋白会与 Ni²⁺ 或 Co²⁺ 结合。与标签蛋白的结合反应受多种独立变量的影响，例如 pH 值、温度、盐类型、盐浓度、固定化金属和配体的密度以及蛋白质大小。结合的蛋白质可通过 pH 梯度递减、咪唑浓度递增或在缓冲液中添加 EDTA 螯合剂进行洗脱。该技术是快速、经济、简便地捕获和纯化组氨酸标签重组蛋白的理想工具。非特异性结合是纯化各种表达系统中组氨酸标签蛋白的一个潜在问题，尤其是在低表达的重组组氨酸标签蛋白或与其他细胞蛋白相互作用的高表达蛋白中。许多因素都可能导致非特异性结合。其中，低表达蛋白或与内源蛋白结合的标记蛋白会导致严重的非特异性结合。His标签蛋白与IMAC金属离子的结合依赖于电荷。当目标蛋白由于丰度低而仅部分结合树脂上的His标签结合位点时，就会发生非特异性结合。其余结合位点则与其他带弱电荷的蛋白（例如富含组氨酸的蛋白）发生非特异性相互作用，从而导致后续的杂质产生。多项证据表明，在结合和洗涤缓冲液中添加还原剂和非离子去垢剂可以显著降低高度非特异性结合，从而获得更纯净的蛋白。IMAC应用中最常用的螯合剂是亚氨基二乙酸（IDA）或次氮基三乙酸（NTA）。这些螯合剂不能与还原剂（例如二硫苏糖醇 (DTT)、β-巯基乙醇 (β-me) 和三(2-羧乙基)膦 (TCEP)）一起使用，因为还原剂会从这些树脂上剥离金属，导致蛋白质结合能力迅速下降。此外，这些螯合剂主要固定在传统的亲和层析基质上，例如琼脂糖树脂或色谱柱。这些固相基质使得纯化过程繁琐、耗时，无法处理极微量的样品，并且难以应用于自动化系统。Bioclone 推出了一种功能强大的基于磁珠的 IMAC 系统来解决这些问题。
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产品特性
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类别磁珠/蛋白质纯化应用说明使用我们的低表达组氨酸标签蛋白纯化试剂盒，可有效纯化表达量低或存在非特异性结合问题的组氨酸标签蛋白。我们采用的还原试剂兼容型磁珠具有高特异性和高容量，并结合磁性，可实现高效纯化。
*仅供研究使用。
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产品概况
